NuSmart^®植物組織PCR試劑盒

（免核酸提取）

試劑盒應用

本試劑盒適用于煙草、擬南芥、水稻、大豆、油菜、玉米、小麥等葉片和種子的PCR、熒光定量PCR 檢測。使用該試劑盒無需液氮研磨，無需使用有機試劑，無需重復離心便可獲得用于PCR反應的基因組模板。

依托Nu-Smart^®平臺DNA-Lysis采用zhuan利配方，5分鐘內獲得花瓣、花蕊、種子、葉片、根、莖等樣本的基因組DNA。葉片僅僅需取材1-4mm，取樣量小，減少對樣品的損耗。

預制的2×TaqMix (With Dye)只需要加入引物和模板DNA即可進行PCR反應，減少移液次數，實現高通量擴增。該體系中添加有電泳緩沖液和染料，PCR結束后直接進行瓊脂糖凝膠電泳，使用方便快捷。

本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等領域。

試劑盒組成

保存條件

-20oC保存。

使用前將DNA-Lysis室溫充分混勻，經常使用可4℃保存。

2×TaqMix (With Dye)溶解后需置于冰上，避免反復凍融。

需要準備

金屬恒溫浴、PCR儀

使用方法

一、不同樣品的處理方法

1. 葉片的處理

（1）用眼科剪或葉片取樣器剪取1-4mm的葉片。

（2）加入20 μL DNA-Lysis。

（3）充分混勻。

（4）置于55℃作用5分鐘。溶液即為DNA模板。

2. 種子和果實的處理

（1）研磨后種子或1-2mm果肉放入離心管中。

（2）加入20 μL DNA-Lysis。

（3）充分混勻。

（4）置于55℃作用5分鐘。

（5）10,000rpm離心1分鐘，上清即為DNA模板。

二、推薦PCR反應體系

※：引物濃度可以在0.1-0.5 μM范圍內進行調節。

三、按照以下方法設定PCR反應

注意事項

一、試劑盒使用前注意事項

（1）所有試劑應按照zhi定溫度儲存。請勿反復凍融。

（2）使用前后均需要對操作區進行消毒，消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均需使用商品化的無酶耗材。

（3）DNA-Lysis頻繁使用，可在4℃保存。長期不使用可放-20℃保存。

二、樣本注意事項

（1）不同葉片使用不同的取樣器進行處理，防止交叉污染導致檢測結果偏差。

（2）葉片剪取不宜過大，以1-4mm為宜。

（3）種子樣本大小不一，建議研磨后使用。

三、試劑盒使用過程中注意事項

（1）PCR過程中推薦使用陰性對照和陽性對照。

（2）整個過程中使用的吸頭、離心管等耗材應丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中，減少環境污染。

（3）2×TaqMix (With Dye)包含染料，可在反應結束后直接進行瓊脂糖凝膠電泳。

（4）不能使用其他品牌的taq酶，進行PCR擴增檢測。

四、試劑盒使用后注意事項

（1）DNA-Lysis處理后的DNA模板可在-20℃保存至少1個月，如需長期保存，可離心后取上清置-80℃保存。避免反復凍融，防止基因組斷裂。

（2）PCR反應完成后，嚴禁在實驗區開蓋。應在污染區進行瓊脂糖凝膠電泳，防止氣溶膠污染。

（3）為防止試劑盒污染，請勿將不同批號試劑盒混用。